産(chǎn)品分(fēn)類
環氧活化瓊脂糖凝膠Epoxy-activated Crystarose 6FF
所屬分(fēn)類:預活化層析
Epoxy-activated Crystarose 是環氧活化的瓊脂糖凝膠,用(yòng)于偶聯好友遊離巯基、氨基和羟基的物(wù)質(zhì)。
- 簡介
Epoxy-activated Crystarose 是環氧活化的瓊脂糖凝膠6FF,用(yòng)于偶聯帶有(yǒu)遊離巯基、氨基和羟基的物(wù)質(zhì)。環氧基偶聯需要在比較苛刻的條件下偶聯,比較高的溫度和比較高的PH值可(kě)以提高偶聯效率。環氧基基質(zhì)主要用(yòng)來偶聯一些小(xiǎo)分(fēn)子物(wù)質(zhì),也可(kě)以用(yòng)來偶聯比較穩定的大分(fēn)子物(wù)質(zhì)如蛋白質(zhì),偶聯後的環氧醚鍵非常穩定,一般情況下不容易脫落,是非常理(lǐ)想的偶聯方式。産(chǎn)品包裝(zhuāng)有(yǒu)25ml、50ml以及更大包裝(zhuāng),産(chǎn)品是保存在含有(yǒu)DMSO的溶液中(zhōng),也有(yǒu)凍幹粉末形式,包裝(zhuāng)有(yǒu)10g、100g。
二、填料特性:
特點 |
使用(yòng)範圍廣,操作(zuò)簡單 |
适用(yòng)範圍 |
帶氨基、巯基、羟基的物(wù)質(zhì)(多(duō)糖,蛋白,核酸,抗體(tǐ)以及小(xiǎo)分(fēn)子) |
基質(zhì) |
交聯瓊脂糖凝膠 |
功能(néng)基團 |
epoxy |
配基密度 |
20-40μmol/ml |
粒徑 |
45-160umμm |
最大流速 |
450cm/h(15cm柱高,DDH2O為(wèi)流動相) |
偶聯條件 |
pH8-14 溫度 4-45 度,時間 1-16 小(xiǎo)時,可(kě)以在水相或者有(yǒu)機相中(zhōng)偶聯 |
産(chǎn)品 |
DMSO保存或幹粉(約4ml/g) |
保存 |
幹粉4-8℃幹燥保存 |
- 适用(yòng)範圍
偶聯小(xiǎo)分(fēn)子成特異基團層析填料,或偶聯抗原抗體(tǐ)成親和層析填料
- 應用(yòng)實例
實驗名(míng)稱:偶聯牛血清白蛋白(BSA)
實驗步驟:
1、 取 BSA 100mg 溶解于 10ml 的 pH8.5 碳酸鈉緩沖液(0.1M)中(zhōng);
2、 用(yòng)天平稱量需要的活化填料 2g,(1g 幹的填料經完全溶脹後約4ml左右),然後用(yòng)
100 毫升水分(fēn)三次抽濾清洗;
3、 将填料加入溶解後的 BSA 溶液中(zhōng)混合,在搖床上振蕩,25℃偶聯 6 小(xiǎo)時;
4、 然後加 20ml 1M Tris-cl PH8.5 ,再反應 6 個小(xiǎo)時封閉剩餘的基團。
5、 偶聯了 BSA 的填料可(kě)以裝(zhuāng)在柱子中(zhōng),然後用(yòng)0.5M NaCl 溶液洗 10 個柱床體(tǐ)積,收集裝(zhuāng)柱子的液體(tǐ)以及清柱子的溶液測定 BSA 的總量。再用(yòng)PH4.0的醋酸鹽緩沖溶液(含0.5M NaCL)和PH8.5的碳酸鹽緩沖溶液(含0.5M NaCL)循環沖洗3遍,去離子水沖 5 個柱床體(tǐ)積,20%乙醇沖洗2個柱體(tǐ)積,最後将填料在 20%乙醇溶液中(zhōng)保存。
6、 BSA 的偶聯量計算方法:BSA 的吸附載量=(G0—G1)/V。
G0:BSA 總使用(yòng)量,單位:mg。
G1:偶聯反應後未偶聯的 BSA 的量,單位:mg。
V: 填料的體(tǐ)積,單位:ml。
備注:該偶聯方法适用(yòng)于偶聯單抗及其它對較穩定蛋白質(zhì)類,均能(néng)獲得較好的偶聯效果。
偶聯的配體(tǐ)如果是小(xiǎo)分(fēn)子物(wù)質(zhì)(例如氨基酸或其他(tā)帶-NH2、-SH、-OH 等基團的小(xiǎo)分(fēn)子)配基,則可(kě)直接将配體(tǐ)配制成NaOH溶液(10-500mM),根據需要提高偶聯的溫度,可(kě)以大大提高偶聯效率。
關鍵詞:
環氧活化瓊脂糖凝膠
應用(yòng)實例
适用(yòng)範圍