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産(chǎn)品分(fēn)類

Phenyl Crystarose 6 HP

所屬分(fēn)類：瓊脂糖填料

本産(chǎn)品将我公(gōng)司自主設計合成的苯基瓊脂糖凝膠，這種疏水層析介質(zhì)具(jù)載量高，的物(wù)理(lǐ)和化學(xué)穩定性好，使用(yòng)壽命長(cháng)，操作(zuò)方便。

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　　Phenyl Crystarose 6FF

　　一、簡介

　　Phenyl Crystarose 6FF是一種苯基疏水層析填料(Hydrophobic Interaction Chromatography HIC),其原理(lǐ)是在高濃度的鹽溶液中(zhōng)，蛋白質(zhì)的疏水基團通過疏水性吸附作(zuò)用(yòng)被吸附到疏水色譜填料的疏水基團上，然後通過逐漸降低鹽濃度的方法來洗脫，蛋白質(zhì)根據疏水性的強弱先後被洗脫。操作(zuò)簡單、實用(yòng)的疏水色譜填料，特别适合分(fēn)離含有(yǒu)高鹽的生物(wù)大分(fēn)子的樣品，也包括多(duō)肽和核酸病毒等等。同時還可(kě)以用(yòng)于一些天然産(chǎn)物(wù)的分(fēn)離純化和脫色等

　　本産(chǎn)品将我公(gōng)司自主設計合成的苯基瓊脂糖凝膠，這種疏水層析介質(zhì)具(jù)載量高，的物(wù)理(lǐ)和化學(xué)穩定性好，使用(yòng)壽命長(cháng)，操作(zuò)方便。良好的批次重複性，放大容易，所以無論是研發還是生産(chǎn)都是理(lǐ)想的選擇，完全和進口兼容。

　　二、親和填料特性：

　　三、适用(yòng)範圍

　　Penyl Crystarose 6FF 疏水性更強，廣泛應用(yòng)于蛋白、多(duō)肽、核酸病毒等生物(wù)大分(fēn)子的分(fēn)離純化，同時也适用(yòng)于一些天然産(chǎn)物(wù)的分(fēn)離純化。

　　四、應用(yòng)實例

　　實驗名(míng)稱：苯基瓊脂糖凝膠 FF 分(fēn)離抗體(tǐ)。

　　實驗步驟：

　　1、取适量Penyl Crystarose 6FF 裝(zhuāng)柱，1.6×20m,柱床體(tǐ)積為(wèi) 10ml

　　2、用(yòng)1-2M硫酸铵緩沖液平衡 2-5 個床體(tǐ)積，流速為(wèi) 5ml/min

　　3、在樣品加入同樣濃度的硫酸铵和平衡緩沖溶液保持一緻，用(yòng) 0.45μm 的濾膜過濾，上樣，流速為(wèi)2ml/min

　　4、用(yòng)平衡緩沖液再沖洗 2-5 個柱床體(tǐ)積，流速為(wèi) 2ml/min

　　5、然後用(yòng)洗脫緩沖液進行洗脫，流速為(wèi) 2ml/min,收集洗脫峰，用(yòng) SDS-PAGE 純化後的效果。

　　6、用(yòng)純水洗 5 個柱床體(tǐ)積，然後再用(yòng) 20%的乙醇流洗 3 個柱床體(tǐ)積，流速為(wèi) 5ml/min,柱子置于+4~8℃環境中(zhōng)保存。

　　7、色譜圖見圖 1,SDS-PAGE 結果見圖 2.

　　緩沖液組成：

　　平衡緩沖液：20mM PBS,1M 硫酸铵，pH7.0.

　　洗脫緩沖液：20mM PBS, pH7.0.

　　五、應用(yòng)的注意事項：

　　1) 色譜柱裝(zhuāng)填

　　1、所有(yǒu)需要用(yòng)到的材料的溫度要與色譜操作(zuò)的溫度一樣，液體(tǐ)更好做脫氣處理(lǐ)。

　　2、在柱子下端加入 20%乙醇，以除去柱子中(zhōng)的空氣，關閉柱子出口，在柱内保留少

　　量的 20%乙醇。

　　3、将凝膠連續倒入柱子時，要用(yòng)玻璃棒的緊靠柱子内壁引流，以減少氣泡的産(chǎn)生，讓填料先自然沉降。

　　4、在裝(zhuāng)柱子前，填料從冰箱中(zhōng)取出至少要室溫放置 2-3 個小(xiǎo)時，這樣避免裝(zhuāng)柱子時由于溫度變化而使柱子中(zhōng)産(chǎn)生氣泡。

　　2) 蛋白的結合

　　通過提高鹽濃度可(kě)以增加蛋白和填料的結合力，從而達到提高分(fēn)離效果的目的。常用(yòng)的鹽有(yǒu)硫酸铵，氯化鈉，硫酸鈉，氯化鉀等。

　　3) 蛋白的洗脫

　　1、如果蛋白的結合力較強，用(yòng)通常的緩沖不能(néng)洗脫，可(kě)以在洗脫液體(tǐ)中(zhōng)增加一些有(yǒu)機溶劑，例如乙二醇，甘油，乙醇等。

　　六、再生清洗

　　用(yòng)純水洗 5 個柱床體(tǐ)積，然後分(fēn)别用(yòng) 0.5M NaOH洗 5 個床體(tǐ)積，再用(yòng)水洗3個柱床體(tǐ)積，然後再用(yòng) 70%的乙醇或 30%異丙醇流洗 5 個柱床體(tǐ)積，然後 20%的乙醇流洗3個柱床體(tǐ)積。在應用(yòng)中(zhōng)，柱子上結合的一些物(wù)質(zhì)如變性蛋白和脂質(zhì)等不能(néng)通過再生過程去除，這種情況下，可(kě)以先用(yòng) 0.5-1%的非離子表面活性劑沖洗5個柱床體(tǐ)積，然後再按上面的再生方法用(yòng)有(yǒu)機溶劑沖洗柱子，這樣效果更好。有(yǒu)機溶劑和水混合很(hěn)容易産(chǎn)生氣泡，為(wèi)了避免這樣情況，可(kě)以把配好的有(yǒu)機溶劑在室溫放置過夜，再使用(yòng)，這樣可(kě)以避免氣泡進柱子而導緻柱子不能(néng)正常使用(yòng)。

　　七、保存

　　在 20%乙醇中(zhōng)，4℃下長(cháng)期保存。

關鍵詞：

瓊脂糖填料

洗脫

乙醇

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