産(chǎn)品分(fēn)類
DS-10脫鹽柱
所屬分(fēn)類:凝膠過濾層析預裝(zhuāng)柱
所屬分(fēn)類:實驗室快速純化
DS-10脫鹽柱是便捷的手動脫鹽柱,所有(yǒu)操作(zuò)不需要借用(yòng)儀器即可(kě)完成,脫鹽效率高,方便快捷
DS-10脫鹽柱
葡聚糖凝膠脫鹽重力預裝(zhuāng)柱
Desalting and Buffer exchange prepacked Gravicolumn
一、DS-10脫鹽柱簡介
DS-10脫鹽柱是便捷的手動脫鹽柱,所有(yǒu)操作(zuò)不需要借用(yòng)儀器即可(kě)完成,脫鹽效率高,方便快捷。該脫鹽柱内含8.5mlCrystadex G-25填料,其孔徑排阻極限為(wèi)5000,分(fēn)子小(xiǎo)于孔徑的則會進入到凝膠孔内,起整個路徑是整個凝膠體(tǐ)積;分(fēn)子大于孔徑的則不會進入凝膠孔内,隻在凝膠的外水體(tǐ)積中(zhōng)流過,所以,大分(fēn)子會較小(xiǎo)分(fēn)子先流出。蛋白回收率95%左右(不同樣品有(yǒu)可(kě)能(néng)存在差異),除鹽效率>97%。該脫鹽柱可(kě)以用(yòng)來去掉大分(fēn)子(>5000)中(zhōng)的鹽、标記物(wù)或其他(tā)小(xiǎo)分(fēn)子雜質(zhì)等,也可(kě)以用(yòng)來交換緩沖溶液。該脫鹽柱上樣體(tǐ)積為(wèi)1.0-2.5ml。
二、操作(zuò)步驟:
- 平衡:打開上下蓋帽,将柱子上面的保護液倒掉,加入平衡緩沖液,柱裏的保護液會自然低落,繼續加入緩沖溶液,一邊滴一邊加,加入3-5個柱體(tǐ)積後,裏面的保護液被完全置換;有(yǒu)紫外檢測器的還需要等到直到紫外吸收基線(xiàn)平穩為(wèi)止,這一步是為(wèi)了盡量去除層析柱中(zhōng)的保護液。
- 進樣:在柱子上層緩沖溶液完全進入柱床後,下面沒有(yǒu)液體(tǐ)流出時可(kě)以加入樣品,并開始計算體(tǐ)積。DS-10的進樣體(tǐ)積為(wèi)1-2.5ml,樣品體(tǐ)積不足2.5ml的,可(kě)以在樣品完全進入柱床裏面後添加緩沖液到總體(tǐ)積2.5ml。
- 洗脫:繼續加入緩沖液進行洗脫,根據圖1洗脫曲線(xiàn)進行洗脫。
注1:這裏所說的緩沖液是實驗者所希望的緩沖液,比如您希望蛋白脫鹽之後的溶液是去離子水,那麽這裏的緩沖液就是去離子水。
注2:洗脫規則是洗脫體(tǐ)積一般是進樣體(tǐ)積的120%左右。可(kě)以根據進樣體(tǐ)積選擇收集終止時間。比如進樣2ml,從2.8ml開始收集,到5.2 ml停止收集,如果樣品體(tǐ)積是2.5ml,則應該收集2.8-5.8ml之間的洗脫液,如圖1。
- 再生保存:該層析柱雖為(wèi)一次性使用(yòng),但也可(kě)以重複再生使用(yòng)。
再生步驟如下:
4.1 去離子水洗柱5個體(tǐ)積
4.2 用(yòng)0.5M氫氧化鈉清洗2-3個體(tǐ)積
4.3 用(yòng)去離子水清洗3個體(tǐ)積
4.4 用(yòng)20%乙醇洗柱5個體(tǐ)積
4.5 再生時因為(wèi)加入氫氧化鈉和乙醇會使流速會變慢,需要耐心等待。
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注:進樣2.5ml完全進入柱床後,在加入3.5ml的緩沖溶液洗脫,并開始收集洗脫液,我們可(kě)以通過去掉起峰和拖尾部分(fēn)樣品達到提高蛋白濃度,減少洗脫體(tǐ)積的效果。
關鍵詞:
凝膠過濾層析預裝(zhuāng)柱
樣品